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LumiReader分離分析儀是一款專(zhuān)注于化學(xué)發(fā)光(Chemiluminescence)?? 檢測(cè)的專(zhuān)用成像系統(tǒng)。其核心設(shè)計(jì)理念是摒棄多功能性,專(zhuān)注于在Western Blot等化學(xué)發(fā)光應(yīng)用領(lǐng)域提供極高的靈敏度、出色的穩(wěn)定性和專(zhuān)業(yè)的定量分析能力。顧名思義,其“分離”特性體現(xiàn)在它通常作為獨(dú)立的分析模塊,需要用戶(hù)自行配置高性能的電腦和專(zhuān)業(yè)軟件來(lái)驅(qū)動(dòng)和控制,這為高級(jí)用戶(hù)提供了高度的靈活性和定制化選擇。
LumiReader并非傳統(tǒng)的多功能凝膠成像系統(tǒng)(如Bio-Rad ChemiDoc或Tanon系列)。它不配備用于核酸凝膠的紫外透射光源,也通常不包含用于熒光檢測(cè)的特定激發(fā)光源。它的專(zhuān)長(zhǎng)只有一個(gè):?捕獲由HRP(辣根過(guò)氧化物酶)或AP(堿性磷酸酶)催化底物(如ECL、ECL Plus等)產(chǎn)生的極微弱化學(xué)發(fā)光信號(hào)。
這種專(zhuān)注性帶來(lái)了巨大優(yōu)勢(shì):
?極致靈敏度?:由于光學(xué)路徑和硬件設(shè)計(jì)專(zhuān)為化學(xué)發(fā)光優(yōu)化,減少了雜散光干擾,使其能夠檢測(cè)到低至飛克(fg)?? 水平的超低豐度蛋白,靈敏度足以媲美甚至超越傳統(tǒng)的X光膠片,同時(shí)擁有遠(yuǎn)勝膠片的動(dòng)態(tài)范圍。
?超寬動(dòng)態(tài)范圍?:采用深度制冷的科學(xué)級(jí)CCD相機(jī),擁有16位或更高的灰度采集能力,動(dòng)態(tài)范圍可達(dá)4.8 OD以上。這意味著它能在一次曝光中同時(shí)清晰捕捉極弱和極強(qiáng)的信號(hào),避免條帶過(guò)曝或欠曝,無(wú)需像膠片那樣進(jìn)行多次嘗試性曝光,為精確定量奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
?定量線性?xún)?yōu)異?:其信號(hào)響應(yīng)在極大的濃度范圍內(nèi)保持良好的線性關(guān)系,確保不同豐度蛋白條帶的光密度值(OD值)能夠真實(shí)反映其實(shí)際含量,是進(jìn)行可靠的半定量或絕對(duì)定量的前提。
?超冷CCD相機(jī)?:這是LumiReader的心臟。相機(jī)核心被冷卻至?-30℃甚至更低,極大程度地抑制了暗電流(熱噪聲),從而在長(zhǎng)時(shí)間曝光采集微弱光信號(hào)時(shí),依然能保持極低的背景噪聲,獲得信噪比(SNR)極高的圖像。
?高效光學(xué)鏡頭?:配備大口徑、高透光率的專(zhuān)業(yè)鏡頭(如F0.95),像一顆“大眼睛”,能夠最大限度地收集微弱的化學(xué)發(fā)光光子,提升檢測(cè)靈敏度。
?密閉暗箱?:分析儀本身是一個(gè)完全避光的密閉暗箱,內(nèi)部涂有防反射涂層,徹底隔絕一切外部光源干擾,為檢測(cè)化學(xué)發(fā)光這一超弱光信號(hào)提供了必需的環(huán)境。
?模塊化與靈活性?:作為“不含電腦/軟件”的分離單元,用戶(hù)可以根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)室的預(yù)算和需求,自由選配不同性能的電腦工作站和圖像采集/分析軟件。高級(jí)用戶(hù)可以選擇像Image-Pro Plus、Fiji/ImageJ? 或?qū)I(yè)版凝膠分析軟件,實(shí)現(xiàn)高度定制化的分析流程。
?應(yīng)用領(lǐng)域?:幾乎完全集中于蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)?? 的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。是生命科學(xué)研究、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、藥物開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域中進(jìn)行蛋白表達(dá)水平分析、蛋白修飾(如磷酸化)研究、抗體效價(jià)測(cè)定等實(shí)驗(yàn)的終極檢測(cè)工具。
?操作流程?:完成Western Blot的一抗二抗孵育及底物顯色反應(yīng)后,將膜(NC膜或PVDF膜)放入暗箱內(nèi)的樣品平臺(tái)上,關(guān)閉艙門(mén)。在電腦軟件上設(shè)置曝光時(shí)間(可從數(shù)秒到數(shù)十分鐘),點(diǎn)擊采集,系統(tǒng)即可完成圖像捕獲。
?數(shù)據(jù)分析?:捕獲的圖像為16位原始數(shù)據(jù)(TIFF格式),隨后在分析軟件中進(jìn)行條帶識(shí)別、背景扣除、光密度積分、分子量計(jì)算以及基于內(nèi)參蛋白(如GAPDH, β-Actin)的標(biāo)準(zhǔn)化定量分析。
LumiReader分離分析儀代表了專(zhuān)業(yè)化、高性能的成像理念。它犧牲了多功能性,換來(lái)了在化學(xué)發(fā)光這一核心應(yīng)用上無(wú)與倫比的性能表現(xiàn)。其主要用戶(hù)群體是對(duì)Western Blot檢測(cè)的靈敏度、定量準(zhǔn)確性和重復(fù)性有極高要求的科研人員和實(shí)驗(yàn)室。
?優(yōu)勢(shì)?:頂級(jí)靈敏度、超寬動(dòng)態(tài)范圍、優(yōu)異的定量線性、系統(tǒng)配置靈活(用戶(hù)自選PC/軟件)。
?考量?:需要用戶(hù)自行配置電腦和軟件,增加了初始設(shè)置的復(fù)雜性;功能單一,無(wú)法進(jìn)行熒光或紫外成像。
對(duì)于專(zhuān)注于蛋白質(zhì)研究,且需要從傳統(tǒng)的X光膠片法升級(jí)到更先進(jìn)、更定量、更安全的數(shù)字成像系統(tǒng)的用戶(hù)來(lái)說(shuō),LumiReader分離分析儀是一個(gè)極具吸引力的專(zhuān)業(yè)選擇。它能夠?qū)estern Blot實(shí)驗(yàn)的最終讀數(shù)環(huán)節(jié)提升到一個(gè)新的水平,為產(chǎn)出高質(zhì)量、可發(fā)表級(jí)的數(shù)據(jù)提供強(qiáng)大支撐。
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